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    原代細胞傳代技術

    點擊次數:1502  更新時間:2015-09-11


    1. 選用原代細胞生長狀態好(90-95%),生長數量大于5×105進行傳代。
     
    2. 吸除原代細胞培養液。用含雙抗的1×PBS(pH7.4)清洗細胞培養瓶2次。
     
    3. 1ml細胞消化液加入細胞培養瓶,輕輕搖動,使細胞消化液覆細胞培養瓶底。
     
    4. 細胞培養瓶置于5%CO2、95%空氣、37oC培養箱靜置培養數分鐘后,在顯微鏡下觀察原代細胞的消化狀態。
     
    請記?。喝缳N壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后,用手指輕輕拍打細胞培養側部或底部至大部分貼壁細胞懸浮,加入細胞終止液,終止細胞消化。每種原代細胞的消化時間是有差異的。
     
    5. 吹打培養瓶中懸浮細胞若干次,再吸出細胞懸浮液,轉入15ml離心管中,1000rpm離心5分鐘。
     
    6. 棄離心管中液體,加入原代細胞培養液重懸細胞。細胞計數,確定細胞數量。
     
        細胞分瓶后,加入適量原代細胞培養液至細胞培養瓶中,置于5%CO2、95%空氣、37oC培養箱靜置培養24小時。
     

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