原代細(xì)胞是剛從體內(nèi)取出的組織中獲得的細(xì)胞，要求不嚴(yán)格的話，十代以內(nèi)都算原代細(xì)胞。因?yàn)殡x體不久，所以其對(duì)外界的刺激的反應(yīng)更接近體內(nèi)的實(shí)際情況，這也是為什么藥篩要用原代細(xì)胞，或者起碼要有原代細(xì)胞的驗(yàn)證。
凍存的原代細(xì)胞該如何開(kāi)始培養(yǎng)？
(1) 將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。
(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。
(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。
(4) 用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。
(5) 打開(kāi)蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意，由于凍存管有負(fù)壓，開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出，這是正常現(xiàn)象）。
(6) 用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。
(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子。
(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中。
(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。
原代細(xì)胞的組織塊培養(yǎng)法：
1）組織塊接種后的前3天，在觀察和移動(dòng)的過(guò)程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。
2）加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。
3）當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。
4）為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。
滬ICP備14030958號(hào)-14 管理登陸 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) GoogleSitemap